فسفوریلاسیون با ترویج ارتباط هیستون H2A با کروماتین، تنظیم کننده اصلی رشد DELLA را در Arabidopsis فعال می کند.

پروتئین های DELLA اصلی حفاظت شده هستندتنظیم کننده های رشدکه نقش اصلی را در کنترل رشد گیاه در پاسخ به نشانه های داخلی و محیطی ایفا می کنند. DELLA به عنوان یک تنظیم کننده رونویسی عمل می کند و با اتصال به فاکتورهای رونویسی (TFs) و هیستون H2A از طریق دامنه GRAS خود، برای هدف قرار دادن پروموترها به کار گرفته می شود. مطالعات اخیر نشان داده است که پایداری DELLA از طریق دو مکانیسم پس از ترجمه تنظیم می شود: پلی یوبی کوئیتیناسیون ناشی از فیتوهورمون جیبرلین، که منجر به تخریب سریع آن می شود، و ترکیب اصلاح کننده های کوچک شبیه یوبیکوئیتین (SUMO) برای افزایش تجمع آن. علاوه بر این، فعالیت DELLA به صورت دینامیکی توسط دو گلیکوزیلاسیون مختلف تنظیم می‌شود: برهمکنش DELLA-TF توسط O-fucosylation افزایش می‌یابد اما با اصلاح N-acetylglucosamine (O-GlcNAc) پیوند O مهار می‌شود. با این حال، نقش فسفوریلاسیون DELLA همچنان نامشخص است، زیرا مطالعات قبلی نتایج متناقضی را نشان داده‌اند، از نتایجی که نشان می‌دهند فسفوریلاسیون باعث ترویج یا کاهش تخریب DELLA می‌شود تا سایرین که نشان می‌دهند فسفوریلاسیون بر پایداری آن تأثیر نمی‌گذارد. در اینجا، ما محل های فسفوریلاسیون را در REPRESSOR شناسایی می کنیمga1-3(RGA، AtDELLA) با تجزیه و تحلیل طیف‌سنجی جرمی از Arabidopsis thaliana خالص شد و نشان داد که فسفوریلاسیون دو پپتید RGA در مناطق PolyS و PolyS/T باعث افزایش اتصال H2A و افزایش فعالیت RGA می‌شود. ارتباط RGA با پروموترهای هدف. قابل ذکر است، فسفوریلاسیون بر تعاملات RGA-TF یا پایداری RGA تأثیر نمی گذارد. مطالعه ما مکانیسم مولکولی را نشان می دهد که توسط آن فسفوریلاسیون باعث ایجاد فعالیت DELLA می شود.
برای روشن کردن نقش فسفوریلاسیون در تنظیم عملکرد DELLA، شناسایی مکان‌های فسفوریلاسیون DELLA در داخل بدن و انجام آنالیزهای عملکردی در گیاهان بسیار مهم است. با خالص‌سازی میل ترکیبی عصاره‌های گیاهی به دنبال آنالیز MS/MS، چندین فسفوزیت در RGA شناسایی شد. در شرایط کمبود GA، فسفوریلاسیون RHA افزایش می یابد، اما فسفوریلاسیون بر پایداری آن تأثیر نمی گذارد. به طور مهمی، سنجش‌های co-IP و ChiP-qPCR نشان داد که فسفوریلاسیون در ناحیه PolyS/T RGA برهم‌کنش آن با H2A و ارتباط آن با پروموترهای هدف را ارتقا می‌دهد، و مکانیسمی را که توسط آن فسفوریلاسیون باعث القای عملکرد RGA می‌شود، آشکار می‌کند.
RGA برای هدف قرار دادن کروماتین از طریق تعامل زیر دامنه LHR1 با TF انتخاب می شود و سپس از طریق ناحیه PolyS/T و زیر دامنه PFYRE به H2A متصل می شود و کمپلکس H2A-RGA-TF را برای تثبیت RGA تشکیل می دهد. فسفوریلاسیون Pep 2 در ناحیه PolyS/T بین دامنه DELLA و دامنه GRAS توسط یک کیناز ناشناس باعث افزایش اتصال RGA-H2A می شود. پروتئین جهش یافته rgam2A فسفوریلاسیون RGA را لغو می کند و ترکیب پروتئین متفاوتی را برای تداخل با اتصال H2A اتخاذ می کند. این منجر به بی ثباتی فعل و انفعالات گذرا TF-rgam2A و جدا شدن rgam2A از کروماتین هدف می شود. این شکل فقط سرکوب رونویسی با واسطه RGA را نشان می دهد. یک الگوی مشابه را می توان برای فعال سازی رونویسی با واسطه RGA توصیف کرد، با این تفاوت که کمپلکس H2A-RGA-TF رونویسی ژن هدف را ترویج می کند و دفسفوریلاسیون rgam2A رونویسی را کاهش می دهد. شکل اصلاح شده از Huang et al.21.
تمامی داده‌های کمی با استفاده از Excel مورد تجزیه و تحلیل آماری قرار گرفت و تفاوت‌های معنی‌دار با استفاده از آزمون t Student مشخص شد. هیچ روش آماری برای تعیین اولیه حجم نمونه استفاده نشد. هیچ داده ای از تجزیه و تحلیل حذف نشد. آزمایش تصادفی نبود. محققان نسبت به توزیع داده ها در طول آزمایش و ارزیابی نتایج کور نبودند. حجم نمونه در فایل افسانه شکل و منبع داده مشخص شده است.
برای اطلاعات بیشتر در مورد طراحی مطالعه، چکیده گزارش نمونه کارها طبیعی مرتبط با این مقاله را ببینید.
داده های پروتئومیکس طیف سنجی جرمی از طریق مخزن شریک PRIDE66 با شناسه مجموعه داده PXD046004 به کنسرسیوم ProteomeXchange ارائه شده است. تمام داده‌های دیگر به‌دست‌آمده در طول این مطالعه در اطلاعات تکمیلی، فایل‌های داده‌های تکمیلی و فایل‌های داده خام ارائه شده‌اند. اطلاعات منبع برای این مقاله ارائه شده است.