اثر سینرژیک روغن‌های ضروری بر روی حشرات بالغ، سمیت پرمترین را علیه پشه آئدس اجیپتی (دوبالان: کولیسیده) افزایش می‌دهد.

در یک پروژه قبلی که کارخانه‌های فرآوری مواد غذایی محلی را برای پشه‌ها در تایلند آزمایش می‌کرد، مشخص شد که روغن‌های اساسی (EOs) گیاهان Cyperus rotundus، galangal و دارچین فعالیت ضد پشه خوبی در برابر Aedes aegypti دارند. در تلاشی برای کاهش استفاده از روش‌های سنتیحشره کش هاو بهبود کنترل جمعیت پشه‌های مقاوم، این مطالعه با هدف شناسایی هم‌افزایی بالقوه بین اثرات کشنده حشرات بالغ اتیلن اکسید و سمیت پرمترین بر پشه‌های آئدس اجیپتی، از جمله سویه‌های مقاوم به پایروتروئید و حساس، انجام شد.
برای ارزیابی ترکیب شیمیایی و فعالیت کشندگی اسانس استخراج شده از ریزوم‌های C. rotundus و A. galanga و پوست C. verum علیه سویه حساس Muang Chiang Mai (MCM-S) و سویه مقاوم Pang Mai Dang (PMD-R). پشه‌های بالغ فعال Ae. Aedes aegypti. همچنین یک زیست‌سنجی بالغ از مخلوط اسانس-پرمترین بر روی این پشه‌های Aedes انجام شد تا فعالیت سینرژیک آن درک شود. سویه‌های aegypti.
بررسی ویژگی‌های شیمیایی با استفاده از روش تحلیلی GC-MS نشان داد که ۴۸ ترکیب از اسانس‌های C. rotundus، A. galanga و C. verum شناسایی شدند که به ترتیب ۸۰.۲۲٪، ۸۶.۷۵٪ و ۹۷.۲۴٪ از کل ترکیبات را تشکیل می‌دهند. سیپرن (۱۴.۰۴٪)، بتا-بیزابولن (۱۸.۲۷٪) و سینامالدئید (۶۴.۶۶٪) به ترتیب اجزای اصلی روغن cyperus، روغن galangal و روغن بالزامیک هستند. در سنجش‌های کشتن بیولوژیکی حشرات بالغ، EVهای C. rotundus، A. galanga و C. verum در کشتن Ae مؤثر بودند. مقادیر LD50 برای پشه‌های aegypti، MCM-S و PMD-R به ترتیب 10.05 و 9.57 میکروگرم بر میلی‌گرم ماده، 7.97 و 7.94 میکروگرم بر میلی‌گرم ماده و 3.30 و 3.22 میکروگرم بر میلی‌گرم ماده بود. کارایی MCM-S و PMD-R Ae در کشتن پشه‌های بالغ aegypti در این اسانس‌ها نزدیک به پیپرونیل بوتوکسید بود (مقادیر PBO، LD50 به ترتیب 6.30 و 4.79 میکروگرم بر میلی‌گرم ماده)، اما به اندازه پرمترین (مقادیر LD50 به ترتیب 0.44 و 3.70 نانوگرم بر میلی‌گرم ماده) برجسته نبود. با این حال، زیست‌سنجی‌های ترکیبی، هم‌افزایی بین اسانس و پرمترین را نشان دادند. هم‌افزایی قابل توجهی با پرمترین در برابر دو سویه از پشه‌های Aedes مشاهده شد. Aedes aegypti در EM گونه‌های C. rotundus و A. galanga مشاهده شد. افزودن روغن‌های C. rotundus و A. galanga به طور قابل توجهی مقادیر LD50 پرمترین را روی MCM-S از 0.44 به 0.07 نانوگرم بر میلی‌گرم و 0.11 نانوگرم بر میلی‌گرم در ماده‌ها، به ترتیب با مقادیر نسبت سینرژی (SR) به ترتیب 6.28 و 4.00 کاهش داد. علاوه بر این، اسانس‌های C. rotundus و A. galanga نیز به طور قابل توجهی مقادیر LD50 پرمترین را روی PMD-R از 3.70 به 0.42 نانوگرم بر میلی‌گرم و 0.003 نانوگرم بر میلی‌گرم در ماده‌ها، به ترتیب با مقادیر SR به ترتیب 8.81 و 1233.33 کاهش دادند.
اثر هم‌افزایی ترکیب EO-پرمترین برای افزایش سمیت پشه‌های بالغ علیه دو سویه از پشه‌های آئدس. آئدس آجیپتی نقش امیدوارکننده‌ای برای اکسید اتیلن به عنوان یک هم‌افزایی در افزایش اثربخشی ضد پشه نشان می‌دهد، به خصوص در مواردی که ترکیبات سنتی بی‌اثر یا نامناسب هستند.
پشه آئدس اجیپتی (دوبالان: کولیسیده) ناقل اصلی تب دنگی و سایر بیماری‌های ویروسی عفونی مانند تب زرد، چیکونگونیا و ویروس زیکا است که تهدیدی بزرگ و مداوم برای انسان‌ها محسوب می‌شود [1، 2]. ویروس دنگی جدی‌ترین تب خونریزی‌دهنده بیماری‌زا است که سالانه 5 تا 100 میلیون مورد ابتلا به آن رخ می‌دهد و بیش از 2.5 میلیارد نفر در سراسر جهان در معرض خطر ابتلا به آن هستند [3]. شیوع این بیماری عفونی بار سنگینی را بر جمعیت، سیستم‌های بهداشتی و اقتصاد اکثر کشورهای گرمسیری وارد می‌کند [1]. طبق گزارش وزارت بهداشت تایلند، در سال 2015، 142925 مورد تب دنگی و 141 مورد مرگ در سراسر کشور گزارش شده است که بیش از سه برابر تعداد موارد و مرگ و میر در سال 2014 است [4]. علیرغم شواهد تاریخی، تب دنگی توسط پشه آئدس ریشه کن شده یا به میزان زیادی کاهش یافته است. پس از کنترل پشه آئدس آئدس آئدس [5]، میزان عفونت به طرز چشمگیری افزایش یافت و بیماری در سراسر جهان گسترش یافت که بخشی از آن به دلیل دهه‌ها گرمایش جهانی است. حذف و کنترل پشه آئدس آئدس آئدس آئدس نسبتاً دشوار است زیرا این پشه ناقل خانگی است که در طول روز در محل سکونت انسان جفت‌گیری، تغذیه، استراحت و تخم‌گذاری می‌کند. علاوه بر این، این پشه توانایی سازگاری با تغییرات یا اختلالات محیطی ناشی از رویدادهای طبیعی (مانند خشکسالی) یا اقدامات کنترلی انسان را دارد و می‌تواند به تعداد اولیه خود بازگردد [6، 7]. از آنجا که واکسن‌های ضد تب دنگی اخیراً تأیید شده‌اند و هیچ درمان خاصی برای تب دنگی وجود ندارد، پیشگیری و کاهش خطر انتقال دنگی کاملاً به کنترل پشه‌های ناقل و از بین بردن تماس انسان با ناقلان بستگی دارد.
به طور خاص، استفاده از مواد شیمیایی برای کنترل پشه اکنون به عنوان یک جزء مهم از مدیریت جامع و یکپارچه ناقل، نقش مهمی در سلامت عمومی ایفا می‌کند. محبوب‌ترین روش‌های شیمیایی شامل استفاده از حشره‌کش‌های کم‌سمی است که علیه لارو پشه (لاروکشی‌ها) و پشه‌های بالغ (آدیدوسایدها) عمل می‌کنند. کنترل لارو از طریق کاهش منبع و استفاده منظم از لاروکشی‌های شیمیایی مانند ارگانوفسفات‌ها و تنظیم‌کننده‌های رشد حشرات مهم تلقی می‌شود. با این حال، اثرات نامطلوب زیست‌محیطی مرتبط با آفت‌کش‌های مصنوعی و نگهداری پرزحمت و پیچیده آنها همچنان یک نگرانی عمده است [8، 9]. کنترل فعال سنتی ناقل، مانند کنترل بالغین، همچنان مؤثرترین وسیله کنترل در طول شیوع بیماری‌های ویروسی است زیرا می‌تواند ناقلین بیماری‌های عفونی را به سرعت و در مقیاس بزرگ ریشه‌کن کند و همچنین طول عمر و طول عمر جمعیت‌های ناقل محلی را کاهش دهد [3]. ، 10]. چهار دسته از حشره‌کش‌های شیمیایی: ارگانوکلرین‌ها (که فقط به عنوان DDT ​​شناخته می‌شوند)، ارگانوفسفات‌ها، کاربامات‌ها و پیرتروئیدها اساس برنامه‌های کنترل ناقل را تشکیل می‌دهند که پیرتروئیدها موفق‌ترین دسته در نظر گرفته می‌شوند. آنها در برابر بندپایان مختلف بسیار مؤثر و برای پستانداران سمیت کمی دارند. در حال حاضر، پیرتروئیدهای مصنوعی اکثر آفت‌کش‌های تجاری را تشکیل می‌دهند و حدود 25٪ از بازار جهانی آفت‌کش‌ها را تشکیل می‌دهند [11، 12]. پرمترین و دلتامترین حشره‌کش‌های پیرتروئیدی با طیف گسترده هستند که برای دهه‌ها در سراسر جهان برای کنترل انواع آفات با اهمیت کشاورزی و پزشکی استفاده شده‌اند [13، 14]. در دهه 1950، DDT به عنوان ماده شیمیایی انتخابی برای برنامه ملی کنترل پشه‌های بهداشت عمومی تایلند انتخاب شد. پس از استفاده گسترده از DDT در مناطق بومی مالاریا، تایلند به تدریج استفاده از DDT را بین سال‌های 1995 تا 2000 کنار گذاشت و آن را با دو پیرتروئید جایگزین کرد: پرمترین و دلتامترین [15، 16]. این حشره‌کش‌های پیرتروئیدی در اوایل دهه 1990 برای کنترل مالاریا و تب دنگی، عمدتاً از طریق پشه‌بند و استفاده از مه‌های حرارتی و اسپری‌های با سمیت بسیار کم معرفی شدند [14، 17]. با این حال، به دلیل مقاومت شدید پشه‌ها و عدم رعایت عمومی به دلیل نگرانی در مورد سلامت عمومی و تأثیر زیست‌محیطی مواد شیمیایی مصنوعی، اثربخشی خود را از دست داده‌اند. این امر چالش‌های قابل توجهی را برای موفقیت برنامه‌های کنترل ناقل تهدید ایجاد می‌کند [14، 18، 19]. برای مؤثرتر کردن این استراتژی، اقدامات متقابل به موقع و مناسب ضروری است. رویه‌های مدیریتی توصیه شده شامل جایگزینی مواد طبیعی، چرخش مواد شیمیایی از طبقات مختلف، افزودن سینرژیست‌ها و مخلوط کردن مواد شیمیایی یا کاربرد همزمان مواد شیمیایی از طبقات مختلف است [14، 20، 21]. بنابراین، نیاز مبرمی به یافتن و توسعه یک جایگزین و سینرژیست سازگار با محیط زیست، مناسب و مؤثر وجود دارد و این مطالعه با هدف رفع این نیاز انجام شده است.
حشره‌کش‌های مشتق‌شده از طبیعت، به‌ویژه آن‌هایی که بر پایه اجزای گیاهی هستند، پتانسیل خود را در ارزیابی جایگزین‌های فعلی و آینده کنترل پشه‌ها نشان داده‌اند [22، 23، 24]. مطالعات متعددی نشان داده‌اند که می‌توان با استفاده از محصولات گیاهی، به‌ویژه روغن‌های ضروری (EOs)، به عنوان قاتلان پشه‌های بالغ، ناقلین مهم پشه را کنترل کرد. خواص ضد پشه در برابر برخی از گونه‌های مهم پشه در بسیاری از روغن‌های گیاهی مانند کرفس، زیره، zedoaria، انیسون، فلفل لوله‌ای، آویشن، Schinus terebinthifolia، Cymbopogon citratus، Cymbopogon schoenanthus، Cymbopogon giganteus، Chenopodium ambrosioides، Cochlospermum planchonii، Eucalyptus ter eticornis، Eucalyptus citriodora، Cananga odorata و Petroselinum Criscum یافت شده است [25،26،27،28،29،30]. اکسید اتیلن اکنون نه تنها به تنهایی، بلکه در ترکیب با مواد گیاهی استخراج شده یا آفت‌کش‌های مصنوعی موجود نیز استفاده می‌شود و درجات مختلفی از سمیت را ایجاد می‌کند. ترکیبات حشره‌کش‌های سنتی مانند ارگانوفسفات‌ها، کاربامات‌ها و پیرتروئیدها با اکسید اتیلن/عصاره‌های گیاهی، اثرات سمی خود را به صورت هم‌افزایی یا آنتاگونیستی اعمال می‌کنند و نشان داده شده است که در برابر ناقلین بیماری و آفات مؤثر هستند [31،32،33،34،35]. با این حال، بیشتر مطالعات در مورد اثرات هم‌افزایی ترکیبات فیتوشیمیایی با یا بدون مواد شیمیایی مصنوعی، بر روی ناقلین حشرات کشاورزی و آفات انجام شده است تا بر روی پشه‌های مهم پزشکی. علاوه بر این، بیشتر کارها در مورد اثرات هم‌افزایی ترکیبات حشره‌کش‌های مصنوعی گیاهی علیه ناقلین پشه بر روی اثر لاروکشی متمرکز شده است.
در مطالعه قبلی که توسط نویسندگان به عنوان بخشی از یک پروژه تحقیقاتی در حال انجام برای غربالگری اینتیمیدکش‌ها از گیاهان خوراکی بومی در تایلند انجام شد، مشخص شد که اکسیدهای اتیلن از Cyperus rotundus، galangal و دارچین فعالیت بالقوه‌ای علیه پشه‌های بالغ Aedes. Egypt دارند [36]. بنابراین، این مطالعه با هدف ارزیابی اثربخشی اسانس‌های (EOs) جدا شده از این گیاهان دارویی علیه پشه‌های Aedes. aegypti، از جمله سویه‌های مقاوم به پیرتروئید و حساس به آن، انجام شد. اثر هم‌افزایی مخلوط‌های دوتایی اتیلن اکسید و پیرتروئیدهای مصنوعی با اثربخشی خوب در بزرگسالان نیز برای کاهش استفاده از حشره‌کش‌های سنتی و افزایش مقاومت در برابر پشه‌های ناقل، به ویژه در برابر Aedes. aegypti، مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفته است. این مقاله به بررسی ویژگی‌های شیمیایی اسانس‌های مؤثر و پتانسیل آنها برای افزایش سمیت پرمترین مصنوعی علیه پشه‌های Aedes. aegypti در سویه‌های حساس به پیرتروئید (MCM-S) و سویه‌های مقاوم (PMD-R) می‌پردازد.
ریزوم‌های C. rotundus و A. galanga و پوست C. verum (شکل 1) که برای استخراج اسانس استفاده می‌شوند، از تأمین‌کنندگان داروهای گیاهی در استان چیانگ مای، تایلند خریداری شدند. شناسایی علمی این گیاهان از طریق مشورت با آقای جیمز فرانکلین ماکسول، گیاه‌شناس هرباریوم، گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم، دانشگاه چیانگ مای (CMU)، استان چیانگ مای، تایلند، و دانشمند واناری چاروئنساپ انجام شد؛ در گروه داروسازی، دانشکده داروسازی، دانشگاه کارنگی ملون، نمونه‌های خانم ووچر از هر گیاه در بخش انگل‌شناسی دانشکده پزشکی دانشگاه کارنگی ملون برای استفاده‌های بعدی ذخیره می‌شوند.
نمونه‌های گیاهی به صورت جداگانه به مدت ۳ تا ۵ روز در فضای باز با تهویه فعال و دمای محیط تقریباً ۳۰ ± ۵ درجه سانتیگراد در سایه خشک شدند تا رطوبت قبل از استخراج روغن‌های ضروری طبیعی (EOs) از بین برود. در مجموع ۲۵۰ گرم از هر ماده گیاهی خشک به صورت مکانیکی به پودر درشت تبدیل شد و برای جداسازی روغن‌های ضروری (EOs) با تقطیر بخار استفاده شد. دستگاه تقطیر شامل یک منتل گرمایش الکتریکی، یک بالن ته گرد ۳۰۰۰ میلی‌لیتری، یک ستون استخراج، یک کندانسور و یک دستگاه Cool ace (Eyela Cool Ace CA-1112 CE, Tokyo Rikakikai Co. Ltd., Tokyo, Japan) بود. ۱۶۰۰ میلی‌لیتر آب مقطر و ۱۰ تا ۱۵ مهره شیشه‌ای را به بالن اضافه کنید و سپس آن را با استفاده از یک بخاری برقی به مدت حداقل ۳ ساعت تا دمای تقریبی ۱۰۰ درجه سانتیگراد گرم کنید تا تقطیر کامل شود و دیگر روغن ضروری تولید نشود. لایه EO با استفاده از یک قیف جداکننده از فاز آبی جدا شد، روی سولفات سدیم بی‌آب (Na2SO4) خشک شد و در یک بطری قهوه‌ای دربسته در دمای 4 درجه سانتیگراد نگهداری شد تا ترکیب شیمیایی و فعالیت بالغین بررسی شود.
ترکیب شیمیایی روغن‌های ضروری همزمان با زیست‌سنجی ماده بالغ انجام شد. تجزیه و تحلیل کیفی با استفاده از یک سیستم GC-MS متشکل از یک کروماتوگراف گازی Hewlett-Packard (ویلمینگتون، کالیفرنیا، ایالات متحده) 7890A مجهز به یک آشکارساز انتخابی جرمی چهار قطبی (Agilent Technologies، ویلمینگتون، کالیفرنیا، ایالات متحده) و یک MSD 5975C (EI) (Agilent Technologies) انجام شد.
ستون کروماتوگرافی – DB-5MS (30 متر × قطر داخلی 0.25 میلی‌متر × ضخامت لایه نازک 0.25 میکرومتر). کل زمان اجرای GC-MS 20 دقیقه بود. شرایط آنالیز به این صورت است که دمای تزریق‌کننده و خط انتقال به ترتیب 250 و 280 درجه سانتیگراد باشد؛ دمای کوره طوری تنظیم شده است که با سرعت 10 درجه سانتیگراد در دقیقه از 50 درجه سانتیگراد به 250 درجه سانتیگراد افزایش یابد، گاز حامل هلیوم است؛ سرعت جریان 1.0 میلی‌لیتر در دقیقه؛ حجم تزریق 0.2 میکرولیتر است (1/10٪ حجمی در CH2Cl2، نسبت تقسیم 100:1)؛ یک سیستم یونیزاسیون الکترونی با انرژی یونیزاسیون 70 eV برای تشخیص GC-MS استفاده می‌شود. محدوده اکتساب 50-550 واحد جرم اتمی (amu) و سرعت اسکن 2.91 اسکن در ثانیه است. درصد نسبی اجزا به صورت درصد نرمال شده بر اساس مساحت پیک بیان می‌شود. شناسایی ترکیبات EO بر اساس شاخص بازداری (RI) آنها انجام می‌شود. RI با استفاده از معادله ون دن دول و کراتز [37] برای سری n-آلکان‌ها (C8-C40) محاسبه و با شاخص‌های بازداری از مقالات [38] و پایگاه‌های داده کتابخانه‌ای (NIST 2008 و Wiley 8NO8) مقایسه شد. هویت ترکیبات نشان داده شده، مانند ساختار و فرمول مولکولی، با مقایسه با نمونه‌های معتبر موجود تأیید شد.
استانداردهای تحلیلی برای پرمترین مصنوعی و پیپرونیل بوتوکسید (PBO، کنترل مثبت در مطالعات هم‌افزایی) از شرکت سیگما-آلدریچ (سنت لوئیس، میسوری، ایالات متحده آمریکا) خریداری شدند. کیت‌های آزمایش بزرگسالان سازمان بهداشت جهانی (WHO) و دوزهای تشخیصی کاغذ آغشته به پرمترین (0.75%) به صورت تجاری از مرکز کنترل ناقلین سازمان بهداشت جهانی در پنانگ، مالزی خریداری شدند. سایر مواد شیمیایی و معرف‌های مورد استفاده دارای درجه تحلیلی بودند و از موسسات محلی در استان چیانگ مای، تایلند خریداری شدند.
پشه‌های مورد استفاده به عنوان ارگانیسم‌های آزمایشی در زیست‌سنجی بالغین، پشه‌های آزمایشگاهی Aedes aegypti بودند که آزادانه جفت‌گیری می‌کردند، از جمله سویه حساس Muang Chiang Mai (MCM-S) و سویه مقاوم Pang Mai Dang (PMD-R). سویه MCM-S از نمونه‌های محلی جمع‌آوری‌شده در منطقه Muang Chiang Mai، استان چیانگ مای، تایلند به دست آمد و از سال 1995 در اتاق حشره‌شناسی گروه انگل‌شناسی، دانشکده پزشکی CMU نگهداری می‌شود [39]. سویه PMD-R که در برابر پرمترین مقاوم بود، از پشه‌های صحرایی که در ابتدا از Ban Pang Mai Dang، منطقه Mae Tang، استان چیانگ مای، تایلند جمع‌آوری شده بودند، جدا شد و از سال 1997 در همان موسسه نگهداری می‌شود [40]. سویه‌های PMD-R تحت فشار انتخابی رشد داده شدند تا سطح مقاومت با قرار گرفتن متناوب در معرض 0.75٪ پرمترین با استفاده از کیت تشخیص WHO با برخی اصلاحات حفظ شود [41]. هر سویه از Ae. آئدس اجیپتی به صورت انفرادی در آزمایشگاهی عاری از عوامل بیماری‌زا در دمای 2 ± 25 درجه سانتیگراد و رطوبت نسبی 10 ± 80 درصد و دوره نوری 14:10 ساعت روشنایی/تاریکی کلونیزه شد. تقریباً 200 لارو در سینی‌های پلاستیکی (33 سانتی‌متر طول، 28 سانتی‌متر عرض و 9 سانتی‌متر ارتفاع) پر از آب لوله‌کشی با تراکم 150 تا 200 لارو در هر سینی نگهداری شدند و دو بار در روز با بیسکویت‌های استریل شده مخصوص سگ تغذیه شدند. کرم‌های بالغ در قفس‌های مرطوب نگهداری شدند و به طور مداوم با محلول ساکارز آبی 10٪ و محلول شربت مولتی ویتامین 10٪ تغذیه شدند. پشه‌های ماده به طور منظم برای تخم‌گذاری خون می‌مکند. پشه‌های ماده دو تا پنج روزه که از خون تغذیه نشده‌اند، می‌توانند به طور مداوم در سنجش‌های بیولوژیکی تجربی بالغین استفاده شوند.
یک سنجش زیستی پاسخ به دوز مرگ و میر EO بر روی پشه‌های ماده بالغ Aedes. aegypti، MCM-S و PMD-R با استفاده از یک روش موضعی اصلاح‌شده طبق پروتکل استاندارد WHO برای آزمایش حساسیت [42] انجام شد. EO از هر گیاه به صورت سریالی با یک حلال مناسب (مثلاً اتانول یا استون) رقیق شد تا یک سری غلظت درجه‌بندی‌شده از 4 تا 6 غلظت به دست آید. پس از بیهوشی با دی‌اکسید کربن (CO2)، پشه‌ها به صورت جداگانه وزن شدند. سپس پشه‌های بیهوش شده روی کاغذ صافی خشک روی یک صفحه سرد سفارشی زیر استریومیکروسکوپ بی‌حرکت نگه داشته شدند تا از فعال شدن مجدد در طول عمل جلوگیری شود. برای هر درمان، 0.1 میکرولیتر از محلول EO با استفاده از یک میکرودیسپنر دستی Hamilton (700 Series Microliter™، شرکت Hamilton، Reno، NV، ایالات متحده آمریکا) به پرونوتوم بالایی ماده‌ها اعمال شد. بیست و پنج ماده با هر غلظت درمان شدند و مرگ و میر از 10٪ تا 95٪ برای حداقل 4 غلظت مختلف متغیر بود. پشه‌های تیمار شده با حلال به عنوان کنترل در نظر گرفته شدند. برای جلوگیری از آلودگی نمونه‌های آزمایش، برای هر EO آزمایش شده، کاغذ صافی را با کاغذ صافی جدید جایگزین کنید. دوزهای مورد استفاده در این زیست‌سنجی‌ها بر حسب میکروگرم EO به ازای هر میلی‌گرم وزن بدن ماده زنده بیان می‌شوند. فعالیت PBO بالغ نیز به روشی مشابه EO ارزیابی شد، و PBO به عنوان کنترل مثبت در آزمایش‌های سینرژیک استفاده شد. پشه‌های تیمار شده در همه گروه‌ها در فنجان‌های پلاستیکی قرار داده شدند و 10٪ ساکارز به همراه 10٪ شربت مولتی ویتامین به آنها داده شد. همه زیست‌سنجی‌ها در دمای 25 ± 2 درجه سانتیگراد و رطوبت نسبی 80 ± 10٪ انجام شد و چهار بار با گروه کنترل تکرار شد. مرگ و میر در طول دوره پرورش 24 ساعته با عدم پاسخ پشه به تحریک مکانیکی بررسی و تأیید شد و سپس بر اساس میانگین چهار تکرار ثبت شد. تیمارهای آزمایشی برای هر نمونه آزمایش با استفاده از دسته‌های مختلف پشه‌ها چهار بار تکرار شدند. نتایج خلاصه شده و برای محاسبه درصد مرگ و میر استفاده شد که برای تعیین دوز کشنده 24 ساعته با استفاده از آنالیز پروبیت مورد استفاده قرار گرفت.
اثر ضدکشندگی سینرژیک EO و پرمترین با استفاده از روش سنجش سمیت موضعی [42] همانطور که قبلاً توضیح داده شد، ارزیابی شد. از استون یا اتانول به عنوان حلال برای تهیه پرمترین در غلظت مورد نظر و همچنین مخلوط دوتایی EO و پرمترین (EO-پرمترین: پرمترین مخلوط با EO با غلظت LD25) استفاده کنید. کیت‌های آزمایش (پرمترین و EO-پرمترین) در برابر سویه‌های MCM-S و PMD-R از Ae. Aedes aegypti ارزیابی شدند. به هر یک از 25 پشه ماده، چهار دوز پرمترین داده شد تا اثربخشی آن در کشتن پشه‌های بالغ آزمایش شود و هر درمان چهار بار تکرار شد. برای شناسایی سینرژیست‌های کاندید EO، 4 تا 6 دوز EO-پرمترین به هر یک از 25 پشه ماده تجویز شد و هر بار استفاده چهار بار تکرار شد. تیمار PBO-پرمترین (پرمترین مخلوط با غلظت LD25 از PBO) نیز به عنوان کنترل مثبت عمل کرد. دوزهای مورد استفاده در این زیست‌سنجی‌ها بر حسب نانوگرم نمونه آزمایشی به ازای هر میلی‌گرم وزن بدن پشه ماده زنده بیان می‌شوند. چهار ارزیابی تجربی برای هر سویه پشه روی دسته‌های پرورش‌یافته به صورت جداگانه انجام شد و داده‌های مرگ و میر جمع‌آوری و با استفاده از پروبیت برای تعیین دوز کشنده 24 ساعته تجزیه و تحلیل شدند.
میزان مرگ و میر با استفاده از فرمول ابوت [43] تنظیم شد. داده‌های تنظیم شده با استفاده از تحلیل رگرسیون پروبیت و با استفاده از برنامه آماری کامپیوتری SPSS (نسخه 19.0) تجزیه و تحلیل شدند. مقادیر کشنده 25%، 50%، 90%، 95% و 99% (به ترتیب LD25، LD50، LD90، LD95 و LD99) با استفاده از فواصل اطمینان 95% مربوطه (CI 95%) محاسبه شدند. اندازه‌گیری‌های معنی‌داری و تفاوت بین نمونه‌های آزمایش با استفاده از آزمون کای دو یا آزمون من-ویتنی یو در هر سنجش بیولوژیکی ارزیابی شدند. نتایج در سطح معنی‌داری 05/0>p از نظر آماری معنی‌دار در نظر گرفته شدند.< 0.05. ضریب مقاومت (RR) با استفاده از فرمول زیر در سطح LD50 تخمین زده می‌شود [12]:
نسبت هم افزایی (RR) > 1 نشان دهنده مقاومت و نسبت هم افزایی ≤ 1 نشان دهنده حساسیت است. مقدار نسبت هم افزایی (SR) هر کاندید هم افزایی به شرح زیر محاسبه می‌شود [34، 35، 44]:
این عامل نتایج را به سه دسته تقسیم می‌کند: مقدار SR برابر با 1±0.05 به عنوان بدون اثر ظاهری در نظر گرفته می‌شود، مقدار SR بزرگتر از 1.05 به عنوان دارای اثر سینرژیک در نظر گرفته می‌شود و مقدار SR برابر با A است که روغن مایع زرد روشن را می‌توان با تقطیر بخار ریزوم‌های C. rotundus و A. galanga و پوست C. verum به دست آورد. بازده محاسبه شده بر اساس وزن خشک به ترتیب 0.15٪، 0.27٪ (وزنی/وزنی) و 0.54٪ (حجمی/حجمی) بود (جدول 1). مطالعه GC-MS از ترکیب شیمیایی روغن‌های C. rotundus، A. galanga و C. verum وجود 19، 17 و 21 ترکیب را نشان داد که به ترتیب 80.22، 86.75 و 97.24٪ از کل اجزا را تشکیل می‌دهند (جدول 2). ترکیبات روغن ریزوم C. lucidum عمدتاً شامل سیپرونن (14.04٪) و پس از آن کارالن (9.57٪)، α-کپسلان (7.97٪) و α-کپسلان (7.53٪) است. جزء شیمیایی اصلی روغن ریزوم گالگال، β-بیزابولن (18.27٪) و پس از آن α-برگاموتن (16.28٪)، 1،8-سینئول (10.17٪) و پیپرونول (10.09٪) است. در حالی که سینامالدئید (64.66٪) به عنوان جزء اصلی روغن پوست C. verum شناسایی شد، سینامیک استات (6.61٪)، α-کوپن (5.83٪) و 3-فنیل پروپیونالدهید (4.09٪) به عنوان اجزای فرعی در نظر گرفته شدند. ساختارهای شیمیایی سیپرن، بتا-بیزابولن و سینامالدئید به ترتیب ترکیبات اصلی C. rotundus، A. galanga و C. verum هستند، همانطور که در شکل 2 نشان داده شده است.
نتایج حاصل از سه آزمایش OO که فعالیت بالغین را در برابر پشه‌های Aedes ارزیابی کردند، در جدول 3 نشان داده شده است. مشخص شد که همه EOها در انواع و دوزهای مختلف اثرات کشنده‌ای بر روی پشه‌های Aedes از خانواده MCM-S دارند. Aedes aegypti. مؤثرترین EO، C. verum است و پس از آن A. galanga و C. rotundus با مقادیر LD50 به ترتیب 3.30، 7.97 و 10.05 میکروگرم بر میلی‌گرم MCM-S در ماده‌ها قرار دارند که کمی بالاتر از 3.22 (U = 1)، Z = -0.775، P = 0.667)، 7.94 (U = 2، Z = 0، P = 1) و 9.57 (U = 0، Z = -1.549، P = 0.333) میکروگرم بر میلی‌گرم PMD-R در زنان است. این مربوط به PBO است که اثر بالغ آن بر PMD-R کمی بیشتر از سویه MSM-S است، با مقادیر LD50 به ترتیب 4.79 و 6.30 میکروگرم بر میلی‌گرم ماده (U = 0، Z = -2.021، P = 0.057). می‌توان محاسبه کرد که مقادیر LD50 گونه‌های C. verum، A. galanga، C. rotundus و PBO در برابر PMD-R به ترتیب تقریباً 0.98، 0.99، 0.95 و 0.76 برابر کمتر از مقادیر آن در برابر MCM-S است. بنابراین، این نشان می‌دهد که حساسیت به PBO و EO بین دو سویه Aedes نسبتاً مشابه است. اگرچه PMD-R نسبت به MCM-S حساس‌تر بود، اما حساسیت Aedes aegypti معنی‌دار نبود. در مقابل، دو سویه Aedes در حساسیت به پرمترین aegypti تفاوت زیادی داشتند (جدول 4). PMD-R مقاومت قابل توجهی در برابر پرمترین (مقدار LD50 = 0.44 نانوگرم بر میلی‌گرم در زنان) با مقدار LD50 بالاتر 3.70 در مقایسه با MCM-S (مقدار LD50 = 0.44 نانوگرم بر میلی‌گرم در زنان) نشان داد (U = 0، Z = -2.309، P = 0.029). اگرچه PMD-R نسبت به MCM-S حساسیت بسیار کمتری به پرمترین دارد، اما حساسیت آن به روغن‌های PBO و C. verum، A. galanga و C. rotundus کمی بیشتر از MCM-S است.
همانطور که در سنجش زیستی ترکیب EO-پرمترین در جمعیت بالغ مشاهده شد، مخلوط‌های دوتایی پرمترین و EO (LD25) یا اثر هم‌افزایی (مقدار SR > 1.05) یا عدم اثر (مقدار SR = 1 ± 0.05) را نشان دادند. اثرات پیچیده مخلوط EO-پرمترین در بزرگسالان بر روی پشه‌های آلبینو آزمایشی. سویه‌های Aedes aegypti MCM-S و PMD-R در جدول 4 و شکل 3 نشان داده شده است. مشخص شد که افزودن روغن C. verum باعث کاهش جزئی LD50 پرمترین در برابر MCM-S و افزایش جزئی LD50 در برابر PMD-R به ترتیب به 0.44-0.42 نانوگرم در میلی‌گرم در زنان و از 3.70 به 3.85 نانوگرم در میلی‌گرم در زنان می‌شود. در مقابل، افزودن روغن‌های C. rotundus و A. galanga به طور قابل توجهی LD50 پرمترین را روی MCM-S از 0.44 به 0.07 (U = 0، Z = -2.309، P = 0.029) و به 0.11 (U = 0) کاهش داد. ، Z) = -2.309، P = 0.029) نانوگرم بر میلی‌گرم زن. بر اساس مقادیر LD50 MCM-S، مقادیر SR مخلوط EO-پرمترین پس از افزودن روغن‌های C. rotundus و A. galanga به ترتیب 6.28 و 4.00 بود. بر این اساس، LD50 پرمترین در برابر PMD-R به طور قابل توجهی از 3.70 به 0.42 (U = 0، Z = -2.309، P = 0.029) و با افزودن روغن‌های C. rotundus و A. galanga (U = 0) به 0.003 نانوگرم بر میلی‌گرم ماده کاهش یافت. مقدار SR پرمترین ترکیب شده با C. rotundus در برابر PMD-R 8.81 بود، در حالی که مقدار SR مخلوط galangal-permethrin 1233.33 بود. نسبت به MCM-S، مقدار LD50 کنترل مثبت PBO از 0.44 به 0.26 نانوگرم بر میلی‌گرم (ماده‌ها) و از 3.70 نانوگرم بر میلی‌گرم (ماده‌ها) به 0.65 نانوگرم بر میلی‌گرم (U = 0، Z = -2.309، P = 0.029) و PMD-R (U = 0، Z = -2.309، P = 0.029) کاهش یافت. مقادیر SR مخلوط PBO-پرمترین برای سویه‌های MCM-S و PMD-R به ترتیب 1.69 و 5.69 بود. این نتایج نشان می‌دهد که روغن‌های C. rotundus و A. galanga و PBO سمیت پرمترین را به میزان بیشتری نسبت به روغن C. verum برای سویه‌های MCM-S و PMD-R افزایش می‌دهند.
فعالیت بالغین (LD50) EO، PBO، پرمترین (PE) و ترکیبات آنها علیه سویه‌های حساس به پایرتروئید (MCM-S) و مقاوم به (PMD-R) پشه‌های آئدس. آئدس اجیپتی
[45]. پیرتروئیدهای مصنوعی در سراسر جهان برای کنترل تقریباً همه بندپایان دارای اهمیت کشاورزی و پزشکی استفاده می‌شوند. با این حال، با توجه به عواقب مضر استفاده از حشره‌کش‌های مصنوعی، به ویژه از نظر توسعه و مقاومت گسترده پشه‌ها، و همچنین تأثیر بر سلامت درازمدت و محیط زیست، اکنون نیاز مبرمی به کاهش استفاده از حشره‌کش‌های مصنوعی سنتی و توسعه جایگزین‌ها وجود دارد [35، 46، 47]. علاوه بر حفاظت از محیط زیست و سلامت انسان، مزایای حشره‌کش‌های گیاهی شامل گزینش‌پذیری بالا، دسترسی جهانی و سهولت تولید و استفاده است که آنها را برای کنترل پشه جذاب‌تر می‌کند [32، 48، 49]. این مطالعه علاوه بر روشن کردن ویژگی‌های شیمیایی روغن‌های ضروری مؤثر از طریق تجزیه و تحلیل GC-MS، قدرت روغن‌های ضروری بالغ و توانایی آنها در افزایش سمیت پرمترین مصنوعی را نیز ارزیابی کرد. aegypti در سویه‌های حساس به پیرتروئید (MCM-S) و سویه‌های مقاوم (PMD-R).
مشخصه‌یابی GC-MS نشان داد که سیپرن (14.04%)، β-بیزابولن (18.27%) و سینامالدئید (64.66%) به ترتیب اجزای اصلی روغن‌های C. rotundus، A. galanga و C. verum بودند. این مواد شیمیایی فعالیت‌های بیولوژیکی متنوعی را نشان داده‌اند. Ahn و همکارانش [50] گزارش دادند که 6-استوکسی‌سیپرن، جدا شده از ریزوم C. rotundus، به عنوان یک ترکیب ضد تومور عمل می‌کند و می‌تواند آپوپتوز وابسته به کاسپاز را در سلول‌های سرطانی تخمدان القا کند. β-بیزابولن، استخراج شده از روغن ضروری درخت مر، سمیت سلولی خاصی را در برابر سلول‌های تومور پستان انسان و موش، هم در شرایط آزمایشگاهی (in vitro) و هم در شرایط درون‌تنی (in vivo) نشان می‌دهد [51]. گزارش شده است که سینامالدئید، که از عصاره‌های طبیعی به دست می‌آید یا در آزمایشگاه سنتز می‌شود، دارای فعالیت‌های حشره‌کشی، ضد باکتری، ضد قارچ، ضد التهاب، تعدیل‌کننده سیستم ایمنی، ضد سرطان و ضد رگ‌زایی است [52].
نتایج زیست‌سنجی فعالیت وابسته به دوز در بزرگسالان، پتانسیل خوبی از اسانس‌های مورد آزمایش را نشان داد و نشان داد که گونه‌های پشه آئدس MCM-S و PMD-R حساسیت مشابهی به EO و PBO دارند. Aedes aegypti. مقایسه اثربخشی EO و پرمترین نشان داد که دومی اثر آلرژی‌زایی قوی‌تری دارد: مقادیر LD50 برای گونه‌های MCM-S و PMD-R در ماده‌ها به ترتیب 0.44 و 3.70 نانوگرم بر میلی‌گرم است. این یافته‌ها توسط مطالعات بسیاری پشتیبانی می‌شوند که نشان می‌دهند آفت‌کش‌های طبیعی، به ویژه محصولات مشتق شده از گیاهان، عموماً نسبت به مواد مصنوعی کمتر مؤثر هستند [31، 34، 35، 53، 54]. این ممکن است به این دلیل باشد که اولی ترکیبی پیچیده از مواد فعال یا غیرفعال است، در حالی که دومی یک ترکیب فعال خالص شده است. با این حال، تنوع و پیچیدگی مواد فعال طبیعی با مکانیسم‌های عمل مختلف ممکن است فعالیت بیولوژیکی را افزایش دهد یا مانع توسعه مقاومت در جمعیت‌های میزبان شود [55، 56، 57]. بسیاری از محققان پتانسیل ضد پشه C. verum، A. galanga و C. rotundus و اجزای آنها مانند β-بیزابولن، سینامالدئید و 1،8-سینئول را گزارش کرده‌اند [22، 36، 58، 59، 60،61، 62،63،64]. با این حال، بررسی مقالات نشان داد که هیچ گزارش قبلی از اثر سینرژیک آن با پرمترین یا سایر حشره‌کش‌های مصنوعی علیه پشه‌های Aedes وجود نداشته است. Aedes aegypti.
در این مطالعه، تفاوت‌های معنی‌داری در حساسیت به پرمترین بین دو سویه آئدس مشاهده شد. آئدس اجیپتی. MCM-S به پرمترین حساس است، در حالی که PMD-R با میزان مقاومت ۸.۴۱، حساسیت بسیار کمتری به آن دارد. در مقایسه با حساسیت MCM-S، PMD-R به پرمترین حساسیت کمتری دارد اما به EO حساس‌تر است و زمینه‌ای برای مطالعات بیشتر با هدف افزایش اثربخشی پرمترین با ترکیب آن با EO فراهم می‌کند. یک زیست‌سنجی مبتنی بر ترکیب هم افزایی برای اثرات بالغین نشان داد که مخلوط‌های دوتایی EO و پرمترین باعث کاهش یا افزایش مرگ و میر آئدس اجیپتی بالغین می‌شوند. افزودن روغن C. verum LD50 پرمترین را در برابر MCM-S کمی کاهش داد اما LD50 را در برابر PMD-R کمی افزایش داد و مقادیر SR به ترتیب ۱.۰۵ و ۰.۹۶ بود. این نشان می‌دهد که روغن C. verum هنگام آزمایش روی MCM-S و PMD-R اثر سینرژیک یا آنتاگونیستی بر پرمترین ندارد. در مقابل، روغن‌های C. rotundus و A. galanga با کاهش قابل توجه مقادیر LD50 پرمترین روی MCM-S یا PMD-R اثر سینرژیک قابل توجهی نشان دادند. هنگامی که پرمترین با EO C. rotundus و A. galanga ترکیب شد، مقادیر SR مخلوط EO-پرمترین برای MCM-S به ترتیب 6.28 و 4.00 بود. علاوه بر این، هنگامی که پرمترین در ترکیب با C. rotundus (SR = 8.81) یا A. galanga (SR = 1233.33) در برابر PMD-R ارزیابی شد، مقادیر SR به طور قابل توجهی افزایش یافت. شایان ذکر است که هم C. rotundus و هم A. galanga سمیت پرمترین را در برابر PMD-R به طور قابل توجهی افزایش دادند. به طور مشابه، مشخص شد که PBO سمیت پرمترین را با مقادیر SR 1.69 و 5.69 به ترتیب برای سویه‌های MCM-S و PMD-R افزایش می‌دهد. از آنجایی که C. rotundus و A. galanga بالاترین مقادیر SR را داشتند، به ترتیب به عنوان بهترین سینرژیست‌ها در افزایش سمیت پرمترین روی MCM-S و PMD-R در نظر گرفته شدند.
چندین مطالعه قبلی اثر هم‌افزایی ترکیبی از حشره‌کش‌های مصنوعی و عصاره‌های گیاهی را علیه گونه‌های مختلف پشه گزارش کرده‌اند. یک سنجش زیستی لاروکشی علیه آنوفل استفنسی که توسط کالایاناسوندارام و داس [65] مورد مطالعه قرار گرفت، نشان داد که فنتیون، یک ارگانوفسفره با طیف گسترده، با Cleodendron inerme، Pedalium murax و Parthenium hysterophorus مرتبط است. هم‌افزایی قابل توجهی بین عصاره‌ها با اثر هم‌افزایی (SF) به ترتیب 1.31، 1.38، 1.40، 1.48، 1.61 و 2.23 مشاهده شد. در غربالگری لاروکشی 15 گونه حرا، عصاره اتر نفتی ریشه‌های خمیده حرا با مقدار LC50 25.7 میلی‌گرم در لیتر، بیشترین تأثیر را در برابر Culex quinquefasciatus داشت [66]. همچنین گزارش شده است که اثر سینرژیک این عصاره و حشره‌کش گیاهی پیرتروم، LC50 پیرتروم را در برابر لارو C. quinquefasciatus از 0.132 میلی‌گرم در لیتر به 0.107 میلی‌گرم در لیتر کاهش می‌دهد، علاوه بر این، در این مطالعه از محاسبه SF برابر با 1.23 استفاده شده است. 34،35،44]. اثربخشی ترکیبی عصاره ریشه گیاه Solanum citron و چندین حشره‌کش مصنوعی (به عنوان مثال، فنتیون، سایپرمترین (یک پیرتروئید مصنوعی) و تایمتوفوس (یک لاروکش ارگانوفسفره)) در برابر پشه‌های آنوفل ارزیابی شد. Stephensi [54] و C. quinquefasciatus [34]. استفاده ترکیبی از سایپرمترین و عصاره اتر نفتی میوه زرد، اثر سینرژیک بر روی سایپرمترین در همه نسبت‌ها نشان داد. مؤثرترین نسبت، ترکیب دوتایی 1:1 با مقادیر LC50 و SF به ترتیب 0.0054 ppm و 6.83 نسبت به An. Stephen West [54] بود. در حالی که مخلوط دوتایی 1:1 از S. xanthocarpum و temephos آنتاگونیست بود (SF = 0.6406)، ترکیب S. xanthocarpum-fenthion (1:1) فعالیت سینرژیک علیه C. quinquefasciatus با SF 1.3125 نشان داد [34]]. Tong و Blomquist [35] اثرات اکسید اتیلن گیاهی را بر سمیت کارباریل (یک کاربامات با طیف گسترده) و پرمترین بر روی پشه‌های Aedes بررسی کردند. Aedes aegypti. نتایج نشان داد که اکسید اتیلن از آگار، فلفل سیاه، ارس، هلیکروسوم، چوب صندل و کنجد، سمیت کارباریل را بر روی پشه‌های Aedes افزایش می‌دهد. مقادیر SR لاروهای آئدس آئدس از 1.0 تا 7.0 متغیر است. در مقابل، هیچ یک از اسانس‌ها برای پشه‌های بالغ آئدس سمی نبودند. در این مرحله، هیچ اثر سینرژیک برای ترکیب آئدس آئدس و EO-کارباریل گزارش نشده است. PBO به عنوان کنترل مثبت برای افزایش سمیت کارباریل علیه پشه‌های آئدس استفاده شد. مقادیر SR لاروها و بالغ‌های آئدس آئدس آئدس آئدس به ترتیب 4.9-9.5 و 2.3 است. فقط مخلوط‌های دوتایی پرمترین و EO یا PBO برای فعالیت لاروکشی آزمایش شدند. مخلوط EO-پرمترین اثر آنتاگونیستی داشت، در حالی که مخلوط PBO-پرمترین اثر سینرژیک علیه پشه‌های آئدس داشت. لاروهای آئدس آئدس آئدس آئدس. با این حال، آزمایش‌های پاسخ به دوز و ارزیابی SR برای مخلوط‌های PBO-پرمترین هنوز انجام نشده است. اگرچه نتایج کمی در مورد اثرات سینرژیک ترکیبات فیتوسنتز علیه ناقلین پشه حاصل شده است، اما این داده‌ها از نتایج موجود پشتیبانی می‌کنند، که چشم‌انداز افزودن سینرژیست‌ها را نه تنها برای کاهش دوز مصرفی، بلکه برای افزایش اثر کشندگی نیز باز می‌کند. کارایی حشرات. علاوه بر این، نتایج این مطالعه برای اولین بار نشان داد که روغن‌های C. rotundus و A. galanga به صورت سینرژیک در مقایسه با PBO در ترکیب با سمیت پرمترین، به طور قابل توجهی اثربخشی بالاتری در برابر سویه‌های حساس به پیرتروئید و مقاوم به پیرتروئید پشه‌های Aedes دارند. Aedes aegypti. با این حال، نتایج غیرمنتظره از تجزیه و تحلیل سینرژیک نشان داد که روغن C. verum بیشترین فعالیت ضد بالغ را در برابر هر دو سویه Aedes داشت. به طرز شگفت‌آوری، اثر سمی پرمترین بر Aedes aegypti رضایت‌بخش نبود. تغییرات در اثرات سمی و اثرات سینرژیک ممکن است تا حدی به دلیل قرار گرفتن در معرض انواع و سطوح مختلف اجزای فعال زیستی در این روغن‌ها باشد.
علیرغم تلاش‌ها برای درک چگونگی بهبود کارایی، مکانیسم‌های هم‌افزایی هنوز مشخص نیست. دلایل احتمالی برای اثربخشی متفاوت و پتانسیل هم‌افزایی ممکن است شامل تفاوت در ترکیب شیمیایی محصولات آزمایش‌شده و تفاوت در حساسیت پشه‌ها مرتبط با وضعیت مقاومت و توسعه باشد. تفاوت‌هایی بین اجزای اصلی و فرعی اکسید اتیلن آزمایش‌شده در این مطالعه وجود دارد و نشان داده شده است که برخی از این ترکیبات اثرات دفع‌کنندگی و سمی علیه انواع آفات و ناقلین بیماری دارند [61،62،64،67،68]. با این حال، ترکیبات اصلی مشخص‌شده در روغن‌های C. rotundus، A. galanga و C. verum، مانند سایپرن، β-بیزابولن و سینامالدئید، در این مقاله برای فعالیت‌های ضد حشرات بالغ و هم‌افزایی آن‌ها علیه Aedes aegypti به ترتیب آزمایش نشده‌اند. بنابراین، مطالعات آینده برای جداسازی مواد مؤثر موجود در هر روغن ضروری و روشن کردن اثربخشی حشره‌کشی و تعاملات هم‌افزایی آن‌ها علیه این ناقل پشه مورد نیاز است. به طور کلی، فعالیت حشره‌کشی به کنش و واکنش بین سموم و بافت‌های حشرات بستگی دارد که می‌توان آن را ساده کرد و به سه مرحله تقسیم کرد: نفوذ به پوست بدن حشره و غشاهای اندام هدف، فعال‌سازی (= تعامل با هدف) و سم‌زدایی. مواد سمی [57، 69]. بنابراین، هم‌افزایی حشره‌کش‌ها که منجر به افزایش اثربخشی ترکیبات سمی می‌شود، حداقل به یکی از این دسته‌ها نیاز دارد، مانند افزایش نفوذ، فعال‌سازی بیشتر ترکیبات انباشته شده یا کاهش کمتر سم‌زدایی ماده فعال آفت‌کش. به عنوان مثال، تحمل انرژی، نفوذ کوتیکول را از طریق یک کوتیکول ضخیم شده به تأخیر می‌اندازد و مقاومت بیوشیمیایی، مانند افزایش متابولیسم حشره‌کش که در برخی از گونه‌های مقاوم حشرات مشاهده شده است [70، 71]. اثربخشی قابل توجه اسانس‌ها (EOs) در افزایش سمیت پرمترین، به ویژه در برابر PMD-R، ممکن است نشان‌دهنده راه‌حلی برای مشکل مقاومت به حشره‌کش‌ها از طریق تعامل با مکانیسم‌های مقاومت باشد [57، 69، 70، 71]. تانگ و بلومکویست [35] با نشان دادن یک تعامل هم‌افزایی بین اسانس‌ها و آفت‌کش‌های مصنوعی، از نتایج این مطالعه پشتیبانی کردند. aegypti، شواهدی از فعالیت مهاری در برابر آنزیم‌های سم‌زدا، از جمله سیتوکروم P450 مونواکسیژنازها و کربوکسیل‌استرازها، که ارتباط نزدیکی با ایجاد مقاومت در برابر آفت‌کش‌های سنتی دارند، وجود دارد. PBO نه تنها گفته می‌شود که یک مهارکننده متابولیک سیتوکروم P450 مونواکسیژناز است، بلکه نفوذ حشره‌کش‌ها را نیز بهبود می‌بخشد، همانطور که با استفاده از آن به عنوان یک کنترل مثبت در مطالعات هم افزایی نشان داده شده است [35، 72]. جالب توجه است که 1،8-سینئول، یکی از اجزای مهم موجود در روغن گالانگال، به دلیل اثرات سمی آن بر گونه‌های حشرات شناخته شده است [22، 63، 73] و گزارش شده است که در چندین زمینه از تحقیقات فعالیت بیولوژیکی اثرات هم افزایی دارد [74]. . ,75,76,77]. علاوه بر این، 1،8-سینئول در ترکیب با داروهای مختلف از جمله کورکومین [78]، 5-فلوروراسیل [79]، مفنامیک اسید [80] و زیدوودین [81] نیز دارای اثر نفوذپذیری در شرایط آزمایشگاهی (in vitro) است. بنابراین، نقش احتمالی 1،8-سینئول در اثر حشره‌کشی سینرژیک نه تنها به عنوان یک ماده فعال، بلکه به عنوان یک افزایش‌دهنده نفوذ نیز می‌باشد. با توجه به سینرژیسم بیشتر با پرمترین، به ویژه در برابر PMD-R، اثرات سینرژیک روغن گالانگال و روغن تریکوزانتس مشاهده شده در این مطالعه ممکن است ناشی از تعامل با مکانیسم‌های مقاومت، یعنی افزایش نفوذپذیری به کلر باشد. پیرتروئیدها فعال‌سازی ترکیبات تجمع یافته را افزایش داده و آنزیم‌های سم‌زدا مانند مونواکسیژنازها و کربوکسیل‌استرازهای سیتوکروم P450 را مهار می‌کنند. با این حال، این جنبه‌ها نیاز به مطالعه بیشتر برای روشن شدن نقش خاص EO و ترکیبات جدا شده آن (به تنهایی یا در ترکیب) در مکانیسم‌های سینرژیک دارند.
در سال 1977، افزایش سطح مقاومت به پرمترین در جمعیت‌های اصلی ناقل در تایلند گزارش شد و طی دهه‌های بعد، استفاده از پرمترین تا حد زیادی با سایر مواد شیمیایی پیرتروئیدی، به ویژه آنهایی که با دلتامترین جایگزین شده بودند، جایگزین شد [82]. با این حال، مقاومت ناقل در برابر دلتامترین و سایر کلاس‌های حشره‌کش‌ها به دلیل استفاده بیش از حد و مداوم در سراسر کشور بسیار رایج است [14، 17، 83، 84، 85، 86]. برای مقابله با این مشکل، توصیه می‌شود آفت‌کش‌های دور ریخته شده که قبلاً مؤثر و برای پستانداران کمتر سمی بودند، مانند پرمترین، به صورت چرخشی یا دوباره استفاده شوند. در حال حاضر، اگرچه استفاده از پرمترین در برنامه‌های اخیر کنترل پشه‌های دولتی کاهش یافته است، اما مقاومت به پرمترین هنوز هم در جمعیت‌های پشه یافت می‌شود. این ممکن است به دلیل قرار گرفتن پشه‌ها در معرض محصولات کنترل آفات خانگی تجاری باشد که عمدتاً از پرمترین و سایر پیرتروئیدها تشکیل شده‌اند [14، 17]. بنابراین، استفاده مجدد موفقیت‌آمیز از پرمترین نیاز به توسعه و اجرای استراتژی‌هایی برای کاهش مقاومت ناقل دارد. اگرچه هیچ یک از روغن‌های ضروری آزمایش‌شده به صورت جداگانه در این مطالعه به اندازه پرمترین مؤثر نبودند، اما همکاری با پرمترین منجر به اثرات هم‌افزایی چشمگیری شد. این یک نشانه امیدوارکننده است که تعامل EO با مکانیسم‌های مقاومت منجر به این می‌شود که ترکیب پرمترین با EO مؤثرتر از حشره‌کش یا EO به تنهایی باشد، به‌ویژه در برابر PMD-R Ae. Aedes aegypti. مزایای مخلوط‌های هم‌افزایی در افزایش اثربخشی، علیرغم استفاده از دوزهای پایین‌تر برای کنترل ناقل، ممکن است منجر به بهبود مدیریت مقاومت و کاهش هزینه‌ها شود [33، 87]. از این نتایج، می‌توان به این نکته اشاره کرد که EOهای A. galanga و C. rotundus در هم‌افزایی سمیت پرمترین در هر دو سویه MCM-S و PMD-R به طور قابل توجهی مؤثرتر از PBO بودند و جایگزین بالقوه‌ای برای کمک‌های ارگوژنیک سنتی هستند.
اسانس‌های انتخاب‌شده اثرات هم‌افزایی قابل‌توجهی در افزایش سمیت بالغین علیه PMD-R Ae. aegypti داشتند، به‌ویژه روغن گالانگال، که دارای مقدار SR تا ۱۲۳۳.۳۳ است، که نشان می‌دهد اسانس‌ها به‌عنوان یک هم‌افزایی در افزایش اثربخشی پرمترین، نویدبخش هستند. این امر ممکن است استفاده از یک محصول طبیعی فعال جدید را تحریک کند که در کنار هم می‌توانند استفاده از محصولات کنترل پشه بسیار مؤثر را افزایش دهند. همچنین پتانسیل اکسید اتیلن را به‌عنوان یک هم‌افزایی جایگزین برای بهبود مؤثر حشره‌کش‌های قدیمی یا سنتی برای رفع مشکلات مقاومت موجود در جمعیت پشه‌ها نشان می‌دهد. استفاده از گیاهان به‌راحتی در دسترس در برنامه‌های کنترل پشه نه‌تنها وابستگی به مواد وارداتی و گران‌قیمت را کاهش می‌دهد، بلکه تلاش‌های محلی را برای تقویت سیستم‌های بهداشت عمومی نیز تحریک می‌کند.
این نتایج به وضوح اثر هم‌افزایی قابل توجه ایجاد شده توسط ترکیب اتیلن اکسید و پرمترین را نشان می‌دهد. این نتایج پتانسیل اتیلن اکسید را به عنوان یک هم‌افزایی گیاهی در کنترل پشه‌ها برجسته می‌کند و اثربخشی پرمترین را در برابر پشه‌ها، به ویژه در جمعیت‌های مقاوم، افزایش می‌دهد. پیشرفت‌ها و تحقیقات آینده نیاز به تجزیه و تحلیل زیستی هم‌افزایی روغن‌های گالانگال و آلپینیا و ترکیبات جدا شده آنها، ترکیبی از حشره‌کش‌های با منشأ طبیعی یا مصنوعی در برابر گونه‌ها و مراحل مختلف پشه‌ها و آزمایش سمیت در برابر موجودات غیرهدف دارد. استفاده عملی از اتیلن اکسید به عنوان یک هم‌افزایی جایگزین مناسب.
سازمان بهداشت جهانی. استراتژی جهانی برای پیشگیری و کنترل تب دنگی 2012-2020. ژنو: سازمان بهداشت جهانی، 2012.
Weaver SC، Costa F.، Garcia-Blanco MA، Ko AI، Ribeiro GS، Saade G.، و همکاران. ویروس زیکا: تاریخچه، ظهور، زیست شناسی و چشم انداز کنترل تحقیقات ضد ویروسی 2016؛ 130:69-80.
سازمان بهداشت جهانی. برگه اطلاعات تب دنگی. 2016. http://www.searo.who.int/entity/vector_borne_tropical_diseases/data/data_factsheet/en/. تاریخ دسترسی: 20 ژانویه 2017
وزارت بهداشت عمومی. وضعیت فعلی موارد تب دنگی و تب خونریزی دهنده دنگی در تایلند. 2016. http://www.m-society.go.th/article_attach/13996/17856.pdf. تاریخ دسترسی: 6 ژانویه 2017
اوی ای ای، گو سی تی، گابلر دی جی. ۳۵ سال پیشگیری از تب دنگی و کنترل ناقلین در سنگاپور. بیماری عفونی ناگهانی. ۲۰۰۶؛ ۱۲: ۸۸۷–۹۳.
موریسون ای سی، زیلینسکی-گوتیِرِز ای، اسکات تی دبلیو، روزنبرگ آر. شناسایی چالش‌ها و ارائه راه‌حل‌هایی برای کنترل ناقل‌های ویروسی آئدس آجیپتی. PLOS Medicine. 2008;5:362–6.
مراکز کنترل و پیشگیری از بیماری‌ها. تب دنگی، حشره‌شناسی و بوم‌شناسی. ۲۰۱۶. http://www.cdc.gov/dengue/entomologyecology/. تاریخ دسترسی: ۶ ژانویه ۲۰۱۷
اوهیمین ای.آی.، آنگایه تی.کی.ان.، باسی اس.ای. مقایسه فعالیت لاروکشی برگ‌ها، پوست، ساقه و ریشه‌های گیاه جاتروپا کورکاس (فرفیون) علیه ناقل مالاریا، آنوفل گامبیا. SZhBR. 2014;3:29-32.
سلیمانی-احمدی م، وطن‌دوست ح، زارع م. ویژگی‌های زیستگاه لارو آنوفل در مناطق مالاریاخیز برنامه ریشه‌کنی مالاریا در جنوب شرقی ایران. Asia Pacific J Trop Biomed. 2014;4(Suppl 1):S73–80.
بلینی آر، زلر اچ، ون بورتل دبلیو. مروری بر رویکردهای کنترل ناقل، پیشگیری و کنترل شیوع ویروس نیل غربی و چالش‌های پیش روی اروپا. انگل ناقل. 2014؛ 7:323.
موتوسامی آر.، شیواکومار ام اس. انتخاب و مکانیسم‌های مولکولی مقاومت به سیپرمترین در کرم‌های قرمز (Amsacta albistriga Walker). فیزیولوژی بیوشیمیایی آفات. 2014؛ 117: 54–61.
رامکومار جی.، شیواکومار ام. اس. مطالعه آزمایشگاهی مقاومت به پرمترین و مقاومت متقاطع کولکس کوینکوفاسیاتوس به سایر حشره‌کش‌ها. مرکز تحقیقات پالاستور. 2015؛ 114: 2553–60.
ماتسوناکا اس، هاتسون دی اچ، مورفی اس دی. شیمی آفت‌کش‌ها: رفاه انسان و محیط زیست، جلد ۳: مکانیسم عمل، متابولیسم و ​​سم‌شناسی. نیویورک: انتشارات پرگامون، ۱۹۸۳.
Chareonviriyaphap T، Bangs MJ، Souvonkert V، Kongmi M، Korbel AV، Ngoen-Klan R. مروری بر مقاومت به حشره‌کش‌ها و اجتناب رفتاری ناقلین بیماری‌های انسانی در تایلند. Parasites vector. 2013;6:280.
Chareonviriyaphap T، Aum-Aung B، Ratanatham S. الگوهای فعلی مقاومت به حشره‌کش‌ها در بین پشه‌های ناقل در تایلند. مجله سلامت عمومی پزشکی جنوب شرقی آسیا. 1999؛ 30: 184-194.
چارئونویریافاپ تی، بانگ ام‌جی، راتاناتام اس. وضعیت مالاریا در تایلند. مجله سلامت عمومی جنوب شرقی آسیا، 2000؛ 31: 225–37.
Plernsub S، Saingamsuk J، Yanola J، Lumjuan N، Thippavankosol P، Walton S، Somboon P. فراوانی زمانی جهش‌های مقاومت در برابر حذف F1534C و V1016G در پشه‌های Aedes aegypti در چیانگ مای، تایلند، و تأثیر جهش‌ها بر کارایی اسپری‌های مه حرارتی حاوی پیرتروئیدها. Aktatrop. 2016;162:125–32.
Vontas J، Kioulos E، Pavlidi N، Moru E، Della Torre A، Ranson H. مقاومت به حشره‌کش در ناقل‌های اصلی دنگی Aedes albopictus و Aedes aegypti. فیزیولوژی بیوشیمیایی آفات. 2012؛ 104:126-31.